產品介紹

CCK8試劑盒（增強型）簡稱CCK8試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK8工作原理：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。

CCK8是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先，MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而CCK8和XTT、MTS產生的formazan都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，CCK8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次，CCK8比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，CCK8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

CCK8應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

使用方法

     一、細胞活性檢測

注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

1.在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（37℃,5%CO2）。

2.向每孔加入10μLCCK8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。

3.將培養板在培養箱內孵育1-4h。

4.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

5.若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下，24h內測定，吸光度不會發生變化。

二、細胞增殖-毒性檢測

1.在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24h（37℃，5%CO2）。

2.向培養板加入1-10μL不同濃度的待測物質。

3.將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48h）。

4.向每孔加入10μLCCK8溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。

5.將培養板在培養箱內孵育1-4h。

6.用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

7.若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24h內測定，吸光度不會發生變化。